実験医学別冊 Experimental Medicine
原理からよくわかる
リアルタイム
PCR実験ガイド
基本からより効率的な解析まで
必要な機器・試薬と実験プロトコール
 出版社  羊土社

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北條浩彦

本書の構成

用語解説

カラー口絵

基本編 リアルタイムPCRの原理

[1]リアルタイムPCRの原理
北條浩彦

  1. インターカレーション法
  2. ハイブリダイゼーション法
    FRETプローブ/TaqManプローブ
  3. LUX(Light Upon eXtension)法
  4. その他の方法:PlexorTMシステム
  5. リアルタイムPCRによってなぜ元のDNA量が判定できるのか?

[2]リアルタイムPCRの定量方法
北條浩彦
協力/ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社,アプライドバイオシステムズジャパン株式会社

  1. リアルタイムPCRで定量できる原理
    PCR増幅曲線/PCR増幅曲線と初期DNA濃度の関係
  2. 検量線を用いた定量方法
  3. 検量線を使った絶対定量と相対定量
    絶対定量法/相対定量法
  4. ΔΔCt法

[3]リアルタイムPCRを使った解析の方法
1)リアルタイムRT-PCR法による遺伝子発現解析
吉崎美和 向井博之

  1. 実験の流れ
    RNA抽出/逆転写反応/リアルタイムPCR/相対定量解析
  2. 後で困らないための実験計画
    mRNA量の補正方法/ΔΔCt法の使い方/レプリケートの取り方

2)TaqMan(R)プローブによる遺伝子変異(SNP)のタイピング
勝本 博

  1. 基本原理
  2. TaqMan(R)MGBプローブ
  3. 実際の操作

3)HybProbe, High Resolution Meltingによる遺伝子変異(SNP)のタイピング
沖田規幸

  1. HybProbeを用いたジェノタイピングについて
    HybProbeの動作原理/HybProbeでの変異検出方法
  2. HRMを用いた変異スクリーニングについて
    HRMでの変異スクリーニングの動作原理/HRMを用いた変異スクリーニングでの変異検出方法
  3. HRMを用いたジェノタイピングについて
    HRMでのジェノタイピングの動作原理/HRMでのジェノタイピング検出方法

4)遺伝子発現量の測定
白神 博

  1. 遺伝子量の測定法の選び方
  2. 検量線を用いた遺伝子発現量解析
    検量線作成用サンプルの準備/検量線作成のための希釈系列作成方法/希釈系列の単位/ターゲット遺伝子と内在性コントロール遺伝子の検量線作成/遺伝子発現量の計算例

5)プライマー,プローブの設計方法
沖田規幸

  1. プライマー,プローブの設計の実際
    プライマー,プローブ設計のアウトライン/ターゲット遺伝子配列の検索/プライマー,プローブの設計/プライマー,プローブチェック/リアルタイムPCRでのウェットチェック

6)アプライドバイオシステムズ リアルタイムPCRシステムの特長と使用法
白神 博

  1. システムの概要
  2. 操作方法の概略

7)ライトサイクラー(R)システムの特長とソフトウェアコンセプト
小林五月

  1. ライトサイクラー(R)システムのコンセプトおよび特徴
  2. ソフトウェアのコンセプトと使用上のキーポイント
    PCR温度設定条件/解析ソフトウェア

実践編 目的別リアルタイムPCR最新活用プロトコール

[1]遺伝子発現解析

1)時計遺伝子の概日発現リズムの定量
生命現象と関連した遺伝子発現変化の解析
小川雪乃  程 肇

2)RNAiによる遺伝子発現抑制効果の評価
内藤雄樹  西 賢二  善野修平  西郷 薫  程 久美子

3)網羅的な遺伝子発現解析
鈴木孝昌

4)内在性コントロール遺伝子の設定
萩原圭祐

[2]マイクロRNA発現解析
北條浩彦

[3]遺伝子多型のタイピング
1)単一塩基多型(SNP)と集団差の解析
大橋 順

2)リアルタイムPCR装置を用いたジェノタイピング
池田仁子 村松正明

[4]遺伝子量解析

1)ゲノム上の遺伝子量に関する解析
コピー数多型の検出
勝本 博

2)DNAメチル化程度の判定
北條浩彦

3)エピジェネティックに関連した解析〜癌とDNAメチル化
山下 聡  丹羽 透

4)ウイルスゲノムの定性的検出
清水則夫  水上美樹  渡邊 健

5)ウイルスゲノムの定量的検出
清水則夫  渡邊 健  水上美樹  渡辺 哲

付録:活用できるWebサイト一覧

索引

コラム

コピー数とは?
検量線作成の希釈溶液
偽遺伝子:存在しないはずのゲノム配列が増幅される!?
内在性コントロールの選択
正確な定量のための工夫


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